siRNA构建


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siRNA构建

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发布时间：2007年09月06日

有效期：2007年09月16日

公　司：上海闪晶分子生物科技有限公司

联系人：张经理先生

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公司基本资料信息

公司名称：	上海闪晶分子生物科技有限公司
电　　话：	86 021 64858053
传　　真：	86 021 64858053
办公地址：	中国上海徐汇区上海市宜山路705号C座6楼8楼
邮　　编：	200233

详细说明

siRNA构建技术服务本公司提供siRNA构建服务，siRNA载体可以在细胞内直接转录出shRNA，其干扰效果等同于siRNA ，而且能够解决siRNA干扰时间短的缺点。siRNA构建,您只需提供需干扰基因的详细信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所属物种，本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA靶序列，在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA载体。可以为您节省大量的时间与精力。siRNA构建,此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。闪晶生物siRNA构建服务程序： 1. siRNA表达载体的选用：本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因，可以无限扩增。可以访问如下网址：http://www.genscript.com/rnai_vector.html 2. 设计siRNA靶序列 A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19 － 21nt 长。可以访问如下网址：http://www.genscript.com/ssl-bin/app/rnai B 、对于每条选定的siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt) 相连，称为 shRNA（short hairpin RNA）。可以访问如下网址：http://www.genscript.com/ssl-bin/app/rnai?op=known C、阴性对照的设立，可以访问如下网址：http://www.genscript.com/ssl-bin/app/scramble 3. 合成模板：合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。 4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后，1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。 5. 连接与转化：把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37 ℃培养过夜。 6. PCR 鉴定 7. 测序鉴定 8.柱抽提阳性克隆载体并定量。 siRNA构建收费标准 1800.00元/个 http://www.shinegene.org.cn/service/sirna.html